OD值在ELISA中的作用
OD值（光密度值）是ELISA檢測中通過酶標儀測定的吸光度指標，直接反映樣本中目標物質的含量。其核心作用包括：
?定量分析基礎?：OD值與目標物濃度呈正相關，濃度越高，OD值越大。
?結果判讀依據?：通過對比樣品OD值與臨界值（如S/CO值）判斷陰陽性。
?標準曲線計算?：標準曲線將OD值轉換為具體濃度，需通過四參數邏輯斯蒂等模型擬合。
影響ELISA OD值的常見因素
?樣本處理?
樣本收集、保存不當（如反復凍融）可能影響待測物穩定性。
溶血、脂濁、類風濕因子等干擾物質會導致假陽性或假陰性。
?試劑質量?
抗體特異性、親和力不足會降低靈敏度或導致假陽性。
酶底物系統配制錯誤或保存不當會顯色異常?。
?操作技術?
?加樣準確性?：未校準的移液器或加樣速度不一致導致孔間體積差異?。
?洗滌技術?：洗滌不導致背景偏高，或過度洗滌破壞抗原-抗體結合?。
?孵育條件?：溫度波動、時間不足或未使用封板膜影響反應效率?。
?儀器與環境?
酶標儀未校準或波長錯誤（如未使用450nm）導致讀數偏差?。
陽光直射、溫度波動等環境因素干擾顯色反應?。
?標準曲線優化?
標準品溶解不充分、稀釋未混勻或加樣不精確導致曲線擬合度差（R2<0.99）?。
優化OD值讀數的關鍵措施
?嚴格操作規范?
加樣時保持垂直，避免氣泡，定期校準移液器?。
洗滌4-5次，每孔250μL，拍干而非過度拍打?。
?質量控制?
使用空白孔和陰性對照監控背景信號?。
分批操作減少操作時差，避免顯色時間不足或過長?。
?樣本與試劑優化?
避免溶血樣本，必要時測定血紅蛋白含量（≤5g/L）。
選擇高靈敏度試劑盒，確保抗體稀釋正確?。
